pei转染试剂广泛应用于多种细胞系包括293、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3、Sf9、HepG2 和 Hela 细胞等。pei转染试剂如何配置呢?
一、pei转染试剂配置前准备:
(1)通过胰酶消化收集细胞,用适当的完q培养基以4×105至8×105细胞/cm2的密度平铺细胞于60mm组织培养皿上(根据实验需要选择培养皿,使细胞贴壁后所占总面积达到培养皿面积的70-90%)。
(2)根据细胞贴壁情况于含5%CO2的37℃温箱中孵育8-24h,当细胞贴壁完q后即可开始转染。
(3)转染前换入2mL预热的无血清培养基。
二、配置PEI-DNA混合物
以60mm组织培养皿用420μL反应总体积为例。准备两支1.5mL离心管,一管将质粒DNA(总量2-8μg为佳)加入240μLHBS中,混匀。另一管中则用HBS将100μM的PEI储存液稀释成10μM,充分混合。然后取180μL10μMPEI溶液加入含有DNA的HBS中,充分混匀后于室温静置20-30min。
三、pei转染试剂配置后细胞孵育
将420μL的PEI-DNA混合液逐滴加入上述单层细胞的细胞培养基中,轻轻摇动平皿混匀,置于含5%~7%CO2的37℃温箱孵育。
注:每次用100μM的核酸PEI转染试剂储存液前都需要先将其充分混匀,保证所取的浓度一致。
四、pei转染试剂配置后细胞培养
培养6-10h后更换为37℃预热的含有血清的培养基,继续培养,16h左右可以观测到报告基因的表达。