Elabscience一步法TUNEL流式凋亡检测试剂盒怎么用？

Elabscience® One-step TUNEL Flow Cytometry Apoptosis Kit 是一款灵敏度高且能快速简便地检测细胞凋亡的产品。该试剂盒可通过流式细胞仪来进行悬浮细胞、贴壁细胞的流式凋亡检测。那么你知道Elabscience一步法TUNEL流式凋亡检测试剂盒怎么用吗？让我们一起来看看吧！

一、实验步骤

1. 收集细胞并进行计数，每组取1×10⁶个细胞，300×g 离心5 min，弃上清。

注：若样本为贴壁细胞，凋亡细胞会有部分悬浮于上清中，上清中的细胞也要收集。

2. 加入200 μL PBS（含 1%BSA）重悬细胞，加入200 μL Fixation Buffer，室温固定60 min（推荐使用摇转方式，或每 15 min 混匀一次）。

3. 加入1mL PBS（含 1%BSA），600×g 离心 5 min，弃上清。

4. 加入200 μL Permeabilization Buffer，冰上破膜 10 min。

注：破膜温度过高或者时间过久会导致细胞破碎，因此建议Permeabilization Buffer 解冻后放置在 4°C，待使用前取出；另外破膜时间最长不要超过15 min。

5. 加入1~2 mL PBS（含 1%BSA）终止破膜，轻轻吹打混匀后，600×g离心 5 min，弃上清。

6. 加入200 μL TdT Equilibration Buffer，轻轻吹打混匀，37°C平衡15 min。

7. 600×g离心5 min，弃上清，收集细胞沉淀。

8. 按照分组参考下表配制标记工作液，每个样本加入100μL反应液（充分混匀，现配现用）。

注：

① TdT Equilibration Buffer 使用前，室温静置直至wan全溶解。冰冻的平衡液融化后可能会出现钴盐结晶，此为正常现象。使用前涡旋混匀。

② Labeling Solution 使用前，请置于冰上溶解，待wan全溶解后离心，用枪头吹打混匀。

③ TdT Enzyme 对温度较敏感，请严格保存于-20°C，使用前取出，使用后立即放回。

④ 配制标记工作液时，建议不要涡旋。

9. 37°C 避光孵育60 min（每 20 min 轻轻摇晃混匀细胞）。

10. 加入1mL Stop Solution轻轻吹打混匀，室温静置5 min，加入 300~500 μL PBS(含 1%BSA)，600×g离心 5 min，弃上清。

11. 加入 200 μL PBS（含 1%BSA）重悬细胞，上机检测。

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