EZBioscience彩色染料法qPCR试剂盒(预混 ROX2型)(A0012-R2)产品介绍

EZBioscience^® 2× Color SYBR Green qPCR 预混液 （ROX2 plus） 使用经过特殊修饰的 Taq DNA 聚合酶，该聚合酶受热启动保护活化技术和优化的qPCR缓冲液系统，以进行基于SYBR Green I的实时荧光定量PCR（qPCR）。该混合物补充了惰性红色染料。以及 EZBioscience^® 彩色逆转录试剂盒含有惰性蓝色染料，以避免移液错误。在qPCR反应中将cDNA和其他组分混合在一起，使溶液变成紫色。这在移液时提供了视觉帮助，并降低了反应设置过程中移液错误的风险，尤其是在使用白色反应容器时。染料不影响qPCR反应的特异性或灵敏度。该混合物以 2× 的反应浓度制备，可直接用于高模板和低模板 qPCR，具有高灵敏度、特异性和可靠性。

常见问题及解决方法：

1. 阴性对照组可观察到明显扩增

原因：使用的试剂或水被污染、引物二聚体的外观

解决方法：更换新试剂或水并重试。反应应在超净台架上进行，以尽量减少空气污染、在35个周期后，阴性E对照组出现扩增是正常的可以结合熔融曲线进行分析

2. ct值出现太晚(大)

原因：放大效率低、模板的浓度太低、模板退化、扩增子太长、反应中存在PCR抑制剂

解决方法：优化反应，尝试三步程序或重新设计引物、增加模板量，同时避免破坏扩增效果、准备新的模板，然后重试、扩增子的长度建议在100bp~200 bp之间、添加模板时通常会引入抑制剂，增加稀释倍数或准备新模板并重试。

3. 扩增曲线形状异常

原因：扩增曲线粗略、曲线断裂、曲线突然下降

解决方法：信号弱而引起的系统整流，升高模板浓度并重复反应、模板的浓度太高，基线的结束值大于Ct值，减少基线的末端(Ct值-4)，并重新分析数据、反应管中存在气泡，当温度升高时，气泡破裂，从而仪器检测到荧光值的突然降低，快速旋转，仔细检查反应前是否有气泡。

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