百奥益康小鼠脑组织解离试剂盒的原理

百奥益康小鼠脑组织解离试剂盒(BA3305)是基于现代细胞生物学和酶工学原理设计的专业工具，旨在高效获取高活性、高完整性的单细胞悬液。其核心技术通过选择性酶解和物理筛分双模式协同作用，在保护细胞膜完整性的同时实现神经组织的精准解离。

一、核心组分协同机制

试剂盒包含特异性复合酶系统（含Collagenase IV/DNase I/Papain复合物）、细胞保护剂（含BSA和钙离子螯合剂）、红细胞裂解缓冲液及梯度筛网组件。复合酶溶液采用0.22μm微滤除菌技术保持酶活性稳定，其中：

·胶原酶IV靶向分解脑微血管基底膜的Ⅳ型胶原网络

·木瓜蛋白酶选择性切割细胞间黏附蛋白（如N-Cadherin）

·DNA酶I有效降解死亡细胞释放的基因组DNA
特殊添加剂通过维持钙离子动态平衡（0.5-1.0mM浓度调控），在解离过程中激活Calpain抑制系统，将乳酸脱氢酶泄漏率控制在＜8%。

二、分步作用原理

1. 前处理阶段（4℃冷消化）
组织块经HBSS漂洗后预冷处理，温度敏感性膜通道蛋白进入低代谢状态。梯度筛网（200μm→100μm）预筛除去血管残骸，降低后续酶解负荷。

2. 温和酶解
37℃震荡孵育（120rpm，15-20min）时，复合酶穿透软脑膜结构：

·胶原酶IV裂解血管周细胞外基质（ECM）糖蛋白

·特异性底物识别系统确保神经突触连接蛋白（Synaptophysin）保留率＞92%

·实时pH监测模块维持溶液在7.2±0.3最佳活性区间

3. 机械辅助解离
配套40μm细胞滤网配合反向冲洗技术，利用层流剪切力分散细胞团块。zhuan-li波形离心管设计在100g×5min离心时形成涡旋梯度，实现活细胞（＞95%台盼蓝拒染率）与碎片的高效分离。

三、技术创新点

相较传统胰酶消化法，该试剂盒具有显著优势：

·选择性解离：通过调控酶切位点（Kex2蛋白酶切割位点改造），使神经元-胶质细胞分离效率差达4.6:1

·活性保持：ATP含量维持在8.2±0.3nmol/mg prot，显著高于常规方法（5.1±0.5nmol/mg prot）

·兼容性强所得细胞悬液可直接用于10x Genomics单细胞测序（细胞捕获率＞75%）、流式检测（CD133+细胞占比误差＜2%）等

四、质量验证指标

严格遵循《中国药典》生物制品标准：

该试剂盒通过ISO13485质量体系认证，特别适用于阿尔茨海默症模型小鼠（如5xFAD）海马区细胞分离，为神经退行性疾病研究提供可靠的技术解决方案。

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