免费咨询热线：
赛默飞Lipofectamine 2000转染试剂（货号11668019）说明书及操作指南
Lipofectamine 2000是赛默飞世尔研发的高效阳离子脂质体转染试剂，适用于哺乳动物细胞的DNA、siRNA及CRISPR组件递送。其采用脂质纳米颗粒技术，在保证转染效率的同时显著降低细胞毒性，被广泛应用于基因表达调控、RNA干扰及基因编辑研究。
· 货号：11668019
· 包装规格：0.75 mL / 1.5 mL
· 适配样本：DNA（质粒、PCR产物）、RNA（siRNA/miRNA/lncRNA）
· 推荐细胞类型：HEK293、HeLa、CHO、原代细胞等
· 储存条件：4℃避光保存（严禁冻存）
· 有效期：未开封12个月，开封后6个月
1. 试剂配制
①稀释液选择：Opti-MEM®（货号31985070）或同类型无血清培养基
②DNA稀释：每孔2-4 μg DNA，用250 μL稀释液混匀
③脂质体稀释：按DNA用量1:2.5比例稀释（如2 μg DNA需5 μL Lipofectamine 2000）
2. 复合物制备
①将DNA与脂质体稀释液等体积混合
②室温静置15-20分钟，形成乳白色复合物（显微镜下可见均匀纳米颗粒）
3. 细胞处理
①转染时细胞密度：70%-80%融合
②移除原培养基，加入1 mL含复合物的新鲜培养基
③37℃培养4-6小时后换液
1. 细胞状态要求
优先选用低传代细胞（P5-P10），原代细胞建议预铺ECM基质（如Matrigel®）
2. 血清干扰机制
DNA转染可保留≤10%血清，RNA转染需全程无血清（避免核酸酶降解）
3. 毒性控制
①贴壁细胞转染时间≤6小时（超时存活率下降20%-30%）
②悬浮细胞建议采用分步换液法
1. CRISPR/Cas9基因编辑体系构建
质粒配比：Cas9质粒（1 μg）: sgRNA（1.5 μg）
共转染支持：可同步递送荧光报告质粒（如pmCherry-C1）
效率验证：转染48小时后Western Blot检测靶蛋白敲除效果（编辑效率≥80%）
2. siRNA沉默实验优化
siRNA工作浓度：20-50 nM
复合物静置时间：严格控制在20分钟内（超时导致效率衰减≥15%）
结果检测：qPCR验证mRNA水平（建议设置GAPDH内参对照）
| 问题现象 | 可能原因 | 解决方案 |
| 转染效率＜50% | DNA纯度不足（OD260/280异常） | 使用酚氯法重新纯化DNA |
| 细胞死亡＞30% | 脂质体过量或转染时间过长 | 降低脂质体比例至1:1.5，缩短转染至4小时 |
| 荧光信号不均匀 | 复合物沉淀 | 转染前涡旋混合液10秒 |
更多有关赛默飞Lipofectamine 2000转染试剂（货号11668019）说明书及操作指南的介绍，欢迎咨询赛默飞Lipofectamine 2000转染试剂（货号11668019）现货供应商——BETWAY Nigeria
！
